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液相色譜儀的基本概念和術(shù)語(一)

更新時間:2011-04-18      點擊次數(shù):2081

一、色譜圖和峰參數(shù)

⑴色譜圖(chromatogram)--樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器,所得到的信號-時間曲線,又稱色譜流出曲線(elutionprofile).

⑵基線(baseline)--流動相沖洗,柱與流動相達(dá)到平衡后,檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時間軸。

⑶噪音(noise)――基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。

⑷漂移(drift)基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起,柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產(chǎn)生漂移。

⑸色譜峰(peak)--組分流經(jīng)檢測器時相應(yīng)的連續(xù)信號產(chǎn)生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱性正態(tài)分布曲線(高斯Gauss曲線)。不對稱色譜峰有兩種:前延峰(leadingpeak)和脫尾峰(tailingpeak).前者少見。

⑹拖尾因子(tailingfactor,T)--T=B/A,用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetryfactor)或不對稱因子(asymmetryfactor)《中國藥典》規(guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。T<0.95為前延峰,T>1.05為拖尾峰。

⑺峰底――基線上峰的起點至終點的距離。

⑻峰高(Peakheight,h)――峰的zui高點至峰底的距離。

⑼峰寬(peakwidth,W)--峰兩側(cè)拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W=4σ。

⑽半峰寬(peakwidthathalf-height,Wh/2)--峰高一半處的峰寬。Wh/2=2.355σ。

⑾標(biāo)準(zhǔn)偏差(standarddeviation,σ)--正態(tài)分布曲線x=±1時(拐點)的峰寬之半。正常峰寬的拐點在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。σ小,分散程度小、極點濃度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。

⑿峰面積(peakarea,A)――峰與峰底所包圍的面積。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h

二、定性參數(shù)(保留值)

⑴死時間(deadtime,t0)--不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間。在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來測定死時間。

⑵死體積(deadvolume,V0)――由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,其他3部粉只起峰擴展作用。為防止峰擴展,這3部分體積應(yīng)盡量減小。V0=F×t0(F為流速)

⑶保留時間(retentiontime,tR)--從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時間。

⑷保留體積(retentionvolume,VR)--從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值時流出溶劑的體積。又稱洗脫體積。VR=F*tR.

⑸調(diào)整保留時間(adjustedretentiontime,tR’)--扣除死時間后的保留時間。也稱折合保留時間(red?retentiontime)。在實驗條件(溫度、固定相等)一定時,tR’只決定于組分的性質(zhì),因此,tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0

⑹調(diào)整保留體積(adjustedretentionvolume,VR’)--扣除死體積后的保留體積。VR=VR-V0或VR=F*tR’

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