一、簡(jiǎn)介
    色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹(shù)脂）、多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10UM等，柱效理論值可達(dá)5～16萬(wàn)／米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對(duì)于同系物分析，只要500即可；對(duì)于較難的分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子，因此一般10～30CM左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。

二、柱效影響因素
    柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到*效率，除柱外死體積要小外，不要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。

三、色譜柱的構(gòu)造
    色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70KG/CM2 時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效，減小管壁效京，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過(guò)拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度，其效果與拋光相同還有使用熔融硅或玻璃襯里的，用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板，是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金，孔徑0.2-20um（5-10 um）,取決于填料粒度,目的是防止填料漏出.

四、分類
   色譜柱按用途分為分析型和制備型兩類,尺寸規(guī)格也不同:①常規(guī)分析柱（常量柱）,內(nèi)徑2-5mm（常量4.6mm,國(guó)內(nèi)又4mm和5mm）,柱長(zhǎng)10～30CM；②窄徑柱（NARROWBORE，又稱細(xì)管徑柱、半微柱SEMI－MICROCOLUMN），內(nèi)徑1～2MM，柱長(zhǎng)10～20CM；③毛細(xì)管柱（又稱微柱MICROCOLUMN），內(nèi)徑0.2～0.5MM；④半制備柱，內(nèi)徑>5MM；⑤實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20～40MM，柱長(zhǎng)10～30CM；⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長(zhǎng)、填料粒徑和折合流速來(lái)確定，目的是為了避免管壁效應(yīng)。

五、柱的發(fā)展方向
    因強(qiáng)調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱，柱長(zhǎng)3～10CM，填料粒徑2～3UM。為提高分析靈敏度，與質(zhì)譜（MS）聯(lián)接，而發(fā)展出窄徑柱、毛細(xì)管柱和內(nèi)徑小于0.2MM的微徑柱（MICROBORE）。細(xì)管徑柱的優(yōu)點(diǎn)是：①節(jié)省流動(dòng)相；②靈敏度增加；③樣品量少；④能使用長(zhǎng)柱達(dá)到高分離度；⑤容易控制柱溫；⑥易于實(shí)現(xiàn)LC－MS聯(lián)用。
    但由于柱體積越來(lái)越小，柱外效應(yīng)的影響就更加顯著，需要更小池體積的檢測(cè)器（甚至采用柱上檢測(cè)），更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能：輸液泵能精密輸出1～100UL/MIHN的低流量，進(jìn)樣閥能準(zhǔn)確、重復(fù)地進(jìn)樣微小體積的樣品。且因上樣量小，要求高靈敏度檢測(cè)器，電化學(xué)檢測(cè)幫質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點(diǎn)。

六、柱的填充和性能評(píng)價(jià)
    色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外，還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下，填料粒度>20um 時(shí)，干法填充制備柱較為合適；顆粒<20um時(shí)，濕法填充較為理想。填充方法一般有四種：①高壓勻漿法，多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充；②徑向加壓法，Waters ；③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；④干法。柱填充的技術(shù)性強(qiáng)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用己填充好的商品柱。
    必須指出，液相色譜柱的獲得，裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié)，但根本問(wèn)題還在于填料本身性能的優(yōu)劣，以及配套的色譜儀系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)是否合理。
    無(wú)論是自己裝填的還是購(gòu)買的色譜柱,使用前都應(yīng)對(duì)其性能進(jìn)行考察,使用期間或放置一段時(shí)間后也要生意重新檢查.柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下（樣品,流動(dòng)相,流速,溫度）下的柱壓,理論塔板高度和塔板數(shù),對(duì)稱因子,容量因子和選擇性因子和選擇性因子的重復(fù)性，或分離度。一般說(shuō)來(lái)容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在或以骨。進(jìn)行柱效比較時(shí)，不要注意柱外效應(yīng)是不有變化。
    一份合格的色譜柱評(píng)價(jià)報(bào)告應(yīng)給出柱的基本參數(shù)，如柱長(zhǎng)，內(nèi)徑，填料的種類，粒度，色譜柱的柱效，不對(duì)稱度和柱壓降等。

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